复方肾怡治疗狼疮肾炎小鼠的疗效及对补体旁路途径激活的研究

背景 狼疮肾炎(LN)是系统性红斑狼疮严重并发症之一,相关研究表明中药复方肾怡(SY)可以调节机体免疫及抑制肾脏纤维化.目前运用复方SY治疗LN的疗效及机制尚不清楚.目的 探究复方SY对LN小鼠的治疗作用及补体旁路途径激活的影响.方法 2021年4—7月,选取35只SPF级MRL/lpr小鼠(8周龄)、6只SPF级C57BL/6J小鼠(8周龄)进行实验.将MRL/lpr小鼠依据随机数字表法分为MRL/lpr组(n=8)及SY低剂量组(n=9)、SY中剂量组(n=9)、SY高剂量组(n=9),C57BL/6J小鼠为正常对照组(n=6).SY低、中、高剂量组分别以15.34、46.02、92.04 g/kg剂量进行复方SY汤剂灌胃,正常对照组及MRL/lpr组以0.5 ml 0.9％氯化钠溶液灌胃.从小鼠12周龄开始干预,1次/d,持续14周.观察各组动物体征,检测尿蛋白与肌酐比值(UPCR),血清抗双链DNA抗体(anti-dsDNA)、抗核抗体(ANA)水平,肾脏组织病理情况,肾脏组织C3、免疫球蛋白G(IgG)、C5b-9免疫沉积情况,肾脏组织α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、Fibronectin及补体蛋白水平.结果 截至干预结束,正常对照组6只小鼠存活,MRL/lpr组3只小鼠存活,SY低、中、高剂量组分别有5、7、9只小鼠存活.(1)正常对照组、SY中剂量组、SY高剂量组小鼠体征量化分值均低于MRL/lpr组(P<0.05).(2)正常对照组、SY各剂量组小鼠干预第9、10、11、12、13周UPCR均低于MRL/lpr组(P<0.05).(3)正常对照组、SY低剂量组、SY高剂量组小鼠干预14周后血清anti-dsDNA水平低于MRL/lpr组(P<0.05);正常对照组、SY各剂量组小鼠干预14周后血清ANA水平低于MRL/lpr组(P<0.05).(4)干预14周后,HE染色可见MRL/lpr组小鼠肾小球内有免疫复合物沉积,PAS染色可见肾小球内有新月体形成;HE染色可见SY各剂量组小鼠肾小球大致正常,而PAS染色可见SY中、高剂量组小鼠肾小球内有系膜细胞增生,伴少量炎细胞浸润.(5)正常对照组、SY各剂量组小鼠干预14周后肾脏组织C3、C5b-9沉积低于MRL/lpr组(P<0.05);SY低剂量组、SY高剂量组小鼠干预14周后肾脏组织IgG免疫沉积低于MRL/lpr组(P<0.05).(6)SY高剂量组小鼠干预14周后肾脏组织CollagenⅠ、Fibronectin、C3、C5、CD35蛋白水平低于MRL/lpr组(P<0.05);SY低、中剂量组小鼠干预14周后肾脏组织Fibronectin、C3、C5、CD35蛋白水平低于MRL/lpr组(P<0.05);正常对照组小鼠干预14周后肾脏组织Fibronectin蛋白水平低于MRL/lpr组(P<0.05).结论 复方SY可改善MRL/lpr小鼠狼疮肾脏损伤,延缓疾病进展,其作用机制可能是通过抑制补体旁路途径的激活.