基于Nrf2/BNIP3信号通路探讨苓桂术甘汤含药血清对心肌细胞线粒体氧化应激的影响

探讨苓桂术甘汤(Linggui Zhugan Decotion)含药血清通过调节核因子E2相关因子2(Nrf2)/B淋巴细胞瘤-2/腺病毒E1B相互作用蛋白3(BNIP3)信号通路对心肌细胞线粒体氧化应激的影响.制备苓桂术甘汤含药血清与空白血清,构建体外H2O2诱导H9c2心肌细胞氧化应激模型,将H9c2细胞分为正常对照组、H2O2模型组、20％空白血清组、20％苓桂术甘汤含药血清组.H9c2细胞按照分组分别预处理12 h后,加入100 μmol·L-1 H2O2继续培养6 h,DCFH-DA检测各组细胞内活性氧(ROS)的水平,calcein AM荧光探针检测线粒体通透性转换孔道(mPTP)的开放程度,Western blot法检测各组细胞中细胞质细胞色素C(CytC)、线粒体CytC、细胞质及细胞核中Nrf2的表达以及BNIP3的变化水平.siRNA-Nrf2转染制备Nrf2沉默的H9c2细胞,观察Nrf2沉默后苓桂术甘汤含药血清对H2O2刺激H9c2细胞后ROS、mPTP、细胞质CytC、线粒体CytC及BNIP3的表达.结果显示,与正常对照组相比,H2O2模型组ROS含量、mPTP开放程度显著增加(P＜0.01),细胞核Nrf2、BNIP3、细胞质CytC表达显著升高(P＜0.01),细胞质Nrf2无明显变化,线粒体CytC表达显著下降(P＜0.01);苓桂术甘汤含药血清干预可以显著降低ROS含量(P＜0.01),抑制mPTP开放程度(P＜0.01),减少细胞质CytC的表达(P＜0.01),升高线粒体CytC的表达(P＜0.01),促进Nrf2核转位(P＜0.05),降低BNIP3表达(P＜0.01).而Nrf2沉默后,苓桂术甘汤含药血清减少ROS产生、降低BNIP3表达及抑制mPTP开放与CytC释放的作用被逆转(P＜0.01).以上结果表明苓桂术甘汤含药血清可以通过调节Nrf2/BNIP3信号通路,减轻心肌细胞线粒体氧化应激损伤.