探究纳米细菌损害HK-2细胞后的指标变化

目的:通过培养纳米细菌,探究纳米细菌(nanobacteria,NB)损伤人肾小管上皮HK-2后Na+/K+ATP酶等指标的改变.方法:选取HK-2细胞,随机分为五组:NB组,一水草酸钙(Calcium oxalate monohydrate,COM)组,纳米级羟基磷灰石(Nanograde hydroxuapatite,nHAP)组,四环素干扰组和空白对照组,在不同组中进行培养HK-2细胞,共培养6h,12h和24h时形态学观察;先将乳酸脱氢酶(LDH)、过氧化氢(H2O2)以及丙二醛(MDA)的含量检测完之后,再经超声粉碎机粉碎HK-2细胞,最后检测各组培养液中ATP酶(Ca2+/Mg2+ATP酶和Na+/K+ATP酶)的活性.结果:经HE可见,同空白对照组相比,NB组HK-2细胞在实验6h时,可见部分细胞胞体膨胀增大,胞核松散,核膜显示不清,刷状缘结构排列紊乱,随着时间的推移,细胞遭到严重破坏,数目减少.COM组HK-2细胞情况与NB组相似,程度略重.NB组HK-2细胞的数量明显多于nHAP组和四环素干扰组.同空白对照组相比,在6h,12h,24h测得COM组中两种ATP酶活性最低,其次为NB组.nHAP组中两种ATP酶活性明显低于NB组,NB组中的两种ATP酶活性均低于四环素干扰组(P＜0.05).与空白对照组相比,COM组中H2O2含量和MDA含量最高,在6h时间点上,LDH含量低于对照组,NB组LDH、H2O2和MDA的含量高于对照组,但H2O2和MDA的含量低于COM组.四环素干扰组中H2O2的含量和MDA的含量明显低于NB组(P＜0.05),nHAP组中H2O2和MDA的含量无明显变化(P＞0.05).结论:HK-2细胞损伤的机制或许由NB诱导脂质过氧化反应造成,也可能联合Na+/K+ATP酶、Ca2+/Mg2+ATP酶活性及LDH、H2O2、MDA的含量来判断其是否受到纳米细菌感染;HK-2细胞被NB作用的时间越长,其HK-2细胞损伤程度越重,晶体黏附量越多;四环素或许可以缓解NB对HK-2细胞的伤害.