miR-18a-3p在肝癌中的表达及其调控ADCY1表达对肝癌细胞侵袭及增殖的影响

背景与目的:研究表明多种microRNA(miRNA)可能在肝癌的发生发展中发挥重要作用,其作用机制仍值得进一步研究和探讨.因此,本研究从已报道的肝癌差异表达miRNA中进一步筛选关键miRNA,并验证和探讨其作用机制.方法:从已发表的研究中筛选出肝癌组织及肝癌患者血清/血浆中与正常肝组织及正常血清/血浆中共同的差异表达miRNA;用qRT-PCR在正常肝细胞与肝癌细胞中对筛选出的目标miRNA表达情况进行验证;用过表达和抑制的方法观察目标miRNA对肝癌细胞侵袭能力(Transwell实验)与增殖能力(MTT实验)的影响,以及在30例临床标本中检测目标miRNA的表达并通过KM plotter网站分析其对肝癌患者生存的影响;通过miRDB和GEPIA数据库预测和分析目标miRNA的靶基因,并用逆转实验和双荧光素酶报告实验进一步验证.结果:在肝癌组织(vs.正常肝组织)及肝癌患者血清/血浆(vs.正常人血清/血浆)中共同高表达的miRNA有4个(miR-18a-3p、miR-221-3p、miR-222-3p、miR-224-3p),共同低表达的miRNA有2个(miR-26a-3p、miR-125b-3p).qRT-PCR实验证实,与正常肝细胞比较,miR-18a在肝癌细胞中高表达,miR-26a在肝癌细胞中低表达(均P＜0.05).过表达/抑制miR-18a-3p表达能促进/降低肝癌细胞的侵袭及生长能力(均P＜0.05),而过表达/抑制miR-26a-3p对肝癌细胞的侵袭及生长能力影响无不法确定.分析结果显示,ADCY1是miR-18a-3p的靶基因,过表达ADCY1能部分逆转miR-18a-3p对肝癌细胞的上述作用,同时,表达上调的miR-18a-3p能通过结合到ADCY1 mRNA 3'UTR抑制ADCY1的表达.结论:miR-18a-3p可能在肝癌的发生发展中起了关键作用,其在肝癌中表达上调,并能通过抑制下游靶基因ADCY1的表达增强进肝癌细胞的侵袭和增殖能力.