伪狂犬病病毒变异株gC抗体间接ELISA检测方法的建立及初步应用

本研究旨在建立变异伪狂犬病病毒FJ-2012株gC蛋白抗体间接ELISA检测方法,掌握不同猪场猪群的gC抗体水平情况.将FJ-2012株gC基因连接至pCzn1载体,转染至Arctic express(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达产物经SDS-PAGE和Western blot验证,通过矩阵法试验、临界值的确定、特异性试验、重复性和敏感性试验,建立PRV-gC抗体间接ELISA检测方法,并对源于不同猪场的280份血清进行PRV-gC抗体检测.结果表明,成功表达获得FJ-2012株pCzn1-gC重组蛋白;建立的间接ELISA方法的最佳抗原包被浓度为10μg·mL-1和最佳样品血清稀释比例为1:50,阴性和阳性判定的OD650nm临界值为0.406～0.438,介于之间的判定为可疑;临床检测结果显示,120份盲样猪血清PRV-gC抗体阳性率为91.67％、PRV-gB抗体阳性率为95.00％,两种抗体检测结果的整体符合率为95.83％;PR不稳定的猪场血样PRV-gC抗体阳性率为96.25％(77/80),而PRV已净化的种猪场血样PRV-gC抗体阳性率为78.75％(63/80).因此,建立的PRV变异株gC抗体间接ELISA检测方法为临床猪血清抗体检测提供了特异、灵敏和稳定的技术,也为开展变异PRV血清学调查奠定基础.