金水缓纤组分方Ⅱ通过调控SETDB1/Snai1表观抑制A549细胞上皮间质转化

目的:基于蛋白赖氨酸N端甲基转移酶SET结构域分支型组1(SET domain,bifurcated 1,SETDB1)表观调控锌指转录因子 1(snail family zinc finger 1,Snai1),探讨金水缓纤组分方 Ⅱ(effective-component compatibility of Jinshui Huanxian formula Ⅱ,ECC-JHF Ⅱ)对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的 A549 细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的调控作用.方法:体外培养A549细胞,通过细胞活性检测试剂盒(cell counting Kit-8,CCK8)检测细胞活力;Western Blot 检测 E-钙粘蛋白(E-cadherin)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN1)、波形蛋白(Vimentin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达水平以筛选ECC-JHF Ⅱ的最佳作用浓度;将A549细胞分为空白组、TGF-β1组、ECC-JHF Ⅱ组和吡非尼酮(pirfenidone,PFD)组,药物干预后,Western Blot检测SETDB1、组蛋白H3第9位点赖氨酸三甲基化(histone H3 lysine 9 trimethylation,H3K9me3)、E-cadherin、N-cadherin、α-SMA、Vimentin、FN1 及 Snai1 的蛋白表达水平;通过 siRNA 转染技术敲低 A549细胞SETDB1表达,检测EMT相关蛋白表达水平考察SETDB1在金水缓纤组分方Ⅱ抑制EMT过程中的作用;将A549细胞分为空白组、TGF-β1组、ECC-JHF Ⅱ组,采用染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)技术观察金水缓纤组分方Ⅱ对Snai1基因启动子上H3K9me3水平的影响.结果:与空白组相比,122.5 g·L-1 ECC-JHF Ⅱ组细胞活力显著降低(P＜0.01),3.83-61.25 g·L-1 ECC-JHF Ⅱ组细胞活力无显著变化,后续实验ECC-JHF Ⅱ的使用浓度为61.25 g·L-1.与 TGF-β1 组相比,ECC-JHF Ⅱ 组 E-cadherin、SETDB1、H3 K9me3 蛋白表达水平显著上调(P＜0.01),N-cadherin、FN1、Vimentin、Snai1和α-SMA蛋白表达水平显著下调(P＜0.01).ChIP实验结果显示,与空白组相比,TGF-β1组Snai1启动子上H3K9me3减少(P＜0.05);与TGF-β1 组相比,ECC-JHF Ⅱ组Snai1启动子上H3K9me3增加(P＜0.01).敲低 SETDB1 后,A549 细胞 SETDB1、H3K9me3、E-cadherin 蛋白表达显著下调(P＜0.01),Snai1、FN1、N-cadherin蛋白表达显著上调(P＜0.05);ECC-JHF Ⅱ干预后A549细胞中SETDB1、H3K9me3、E-cadherin蛋白表达显著下调(P＜0.01),Snai1、FN1、N-cadherin蛋白表达显著上调(P＜0.01).结论:ECC-JHF Ⅱ可通过上调SETDB1/H3K9me3表观抑制Snai1表达,缓解TGF-β1诱导的A549细胞EMT.