黄芪甲苷对棕榈酸诱导的小鼠RAW264.7细胞铁死亡的调控作用

目的:探讨黄芪甲苷(astragaloside IV,ASIV)对棕榈酸(palmitic acid,PA)诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞铁死亡的调控作用.方法:选取对数生长期的RAW264.7细胞,加入终浓度为0、50、100、150和200 mg/L的ASIV,或0、100、200和400μmol/L的PA,细胞成像仪培养48 h后计数分析,观察ASIV和PA对RAW264.7细胞活力的影响.再将RAW264.7细胞分为对照组、PA(200μmol/L)组和PA(200μmol/L)+ASIV(100 mg/L)组.油红O染色观察RAW264.7细胞脂质沉积情况;细胞免疫荧光染色观察RAW264.7细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4(gluta?thione peroxidase 4,GPX4)及铁蛋白重链1(ferritin heavy chain 1,FTH1)的蛋白表达水平;RT-qPCR和Western blot测定GPX4、FTH1、P53和溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)的mRNA和蛋白表达水平;活性氧(reactive oxygen species,ROS)荧光探针检测各组RAW264.7细胞ROS水平.结果:细胞成像仪筛选出200μmol/L和100 mg/L分别为后续实验中PA和ASIV的相对最佳浓度.与对照组相比,PA组细胞核缩小且不清晰,细胞质内可见弥漫性橘红色脂滴;细胞免疫荧光结果显示,PA组GPX4和FTH1蛋白平均荧光强度显著降低(P<0.01);PA组P53表达显著增加(P<0.05),SLC7A11、GPX4和FTH1表达均显著减少(P<0.05);PA组ROS水平显著增高(P<0.05).与PA组相比,PA+ASIV组细胞核部分恢复正常,细胞质内橘红色脂滴减少;PA+ASIV组GPX4和FTH1蛋白平均荧光强度显著升高(P<0.01);PA+ASIV组P53表达显著降低(P<0.05),SLC7A11和GPX4表达显著增加(P<0.05),FTH1蛋白表达未见显著差异(P>0.05);PA+ASIV组ROS水平显著降低(P<0.05).结论:ASIV能够抑制小鼠RAW264.7巨噬细胞的脂质沉积,可能与调控铁死亡相关因子表达有关.