病原宏基因组高通量测序技术质量评价参考品的建立

目的 建立医疗机构病原宏基因组高通量测序(mNGS)本地化检测质量评价所需参考品.方法 10种微生物按1:10梯度稀释3个浓度水平后,分别与临床样本相近的人源细胞浓度混合.人源细胞按1:10梯度稀释3个浓度水平后,分别与低浓度微生物混合.对参考品冻融稳定性进行研究.结果 D1系列参考品包含:人源细胞为105 cells/mL,微生物约为105～103 CFU/mL的D1-1～D1-3以及不含微生物的D0;微生物约为103 CFU/mL,人源细胞为105～103 cells/mL的D1-3、D1-2(10)和D1-1(100).D2系列参考品与D1系列设置相同.对参考品进行检测(以D1系列为例):D1-1～D1-3各检测1次,参考品中微生物均检出、其他微生物未检出;D1-2重复检测3次,各微生物检出序列数的变异系数为18％～49％;D1-1～D1-3以及D1-3、D1-2(10)和D1-1(100)两组参考品中各微生物检出的序列数的线性相关系数|r|为0.86～0.96.参考品冻融2次后检测,各微生物的检出序列数均下降.结论 建立了包含10种微生物的参考品及其使用方法,可用于医疗机构mNGS本地化检测质量评价.