miR-383-5p调控IGF2BP1抑制直肠癌细胞EMT及侵袭迁移的研究

目的 探究microRNA-383-5p(miR-383-5p)在直肠癌的表达及其对直肠癌转移的调控机制.方法 体外培养人直肠癌细胞SW837、SW1463、HR-8348和人正常结直肠黏膜细胞FHC,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中miR-383-5p、胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(IGF2BP1)mRNA表达水平.取对数生长期的SW837细胞,分成对照组(NC组,不进行任何转染)、mimic-NC 组(转染 miR-383-5p mimic 阴性对照)、miR-383-5p 过表达组(转染 miR-383-5p mimic)、miR-383-5p 过表达+pcDNA3.1-NC 组(miR-383-5p mimic 和 pcDNA3.1-IGF2BP1 阴性对照空载体质粒共转染)、miR-383-5p 过表达+pcDNA3.1-IGF2BP1组(miR-383-5p mimic和pcDNA3.1-IGF2BP1共转染),转染48h后,RT-qPCR检测转染效果;CCK-8法检测细胞增殖活力;划痕愈合实验和Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力;Western Blot检测细胞中IGF2BP1和上皮-间质转化(EMT)相关蛋白的表达;双荧光素酶报告基因验证miR-383-5p与IGF2BP1的靶向关系.结果 直肠癌细胞中miR-383-5p的表达显著低于人正常结直肠黏膜细胞FHC,而IGF2BP1 mRNA在直肠癌细胞中呈高表达(P＜0.05).与NC组相比,miR-383-5p过表达组细胞中miR-383-5p、E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达显著升高,IGF2BP1 mRNA和蛋白的表达、细胞增殖活性、划痕愈合率、进入Transwell小室下层的细胞数量、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(VIM)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达显著降低(P＜0.05);且在过表达miR-383-5p的基础上,上调IGF2BP1的表达,miR-383-5p过表达对SW837细胞增殖、迁移和侵袭以及EMT的抑制作用被减弱.双荧光素酶报告基因检测结果显示,miR-383-5p的高表达可显著抑制转染IGF2BP1-WT的细胞荧光素酶活性(P＜0.05).结论 miR-383-5p过表达可能通过靶向下调IGF2BP1,抑制直肠癌细胞EMT及侵袭迁移.