转录因子cpcR同源基因cpcR-c1和cpcR-t的功能鉴定

苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)LM1212菌株与典型的Bt菌株表型不同,可分化形成芽胞、形成细胞和晶体产生细胞.在LM1212菌株中,转录因子CpcR不仅参与了细胞分化过程,而且能够激活晶体蛋白基因cry35-like的启动子(P35).[目的]筛选cpcR同源基因,验证其生物学功能.[方法]本研究克隆了 2个cpcR同源基因,来源于蜡样芽胞杆菌的cpcR-c1和来源于东洋芽胞杆菌的cpcR-t,将cpcR及其同源基因分别构建在pHT304-P35-gfp、pHT304-P35-lacZ报告载体上,获得的重组质粒转入无cpcR基因且无晶体蛋白基因的Bt HD73-菌株中.利用激光共聚焦显微镜观察重组菌HD-(cpcR-c1-P35-gfp)和 HD-(cpcR-t-P35-gfp)的细胞表型并进行芽胞计数实验.测定HD-(cpcR-c1-P35-lacZ)和HD-(cpcR-t-P35-lacZ)菌株的β-半乳糖苷酶活性.[结果]与对照菌株相比,HD-(cpcR-c1-P35-gfp)菌株和HD-(cpcR-t-P35-gfp)菌株的芽胞细胞数分别降低了 80.79％和90.14％,晶体产生细胞比例分别提高了 7倍和9倍,并且gfp基因在这2个菌株中均能表达.β-半乳糖苷酶活性检测结果显示,启动子P35在HD-(cpcR-c1-P35-lacZ)菌株和HD-(cpcR-t-P35-lacZ)菌株中有较高的转录活性.[结论]cpcR同源基因cpcR-c1、cpcR-t也能够影响细胞分化,激活P35的转录,且cpcR-c1对P35的激活能力大于cpcR.