多西环素对角膜瘢痕形成的影响

目的:研究多西环素对角膜瘢痕形成的影响.方法:(1)体外实验:收集人眼角膜基质分离并培养,使用免疫荧光双染鉴定所提取到的细胞为人角膜细胞.多西环素组在传代培养后加入重组人转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人角膜细胞分化成角膜肌成纤维细胞,培养2 h后加入浓度为20 ng/mL的多西环素溶液,另设不加入任何药物的对照组和只加入TGF-βi的模型组,放入培养箱继续培养48 h.蛋白免疫印迹(Western blotting)检测Collagen Ⅰ和Fibronectin蛋白表达;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测Collagen Ⅰ和Fibronectin mRNA相对表达量.(2)体内实验:采用36只雌性SD大鼠构建角膜碱烧伤模型,随机分为对照组和多西环素组,每组18只.采用体视显微镜观察大鼠角膜恢复情况并在第3、第7、第14天进行角膜混浊度评分,角膜取材后做HE染色观察大鼠角膜组织结构变化.结果:模型组细胞Fibronectin、Collagen Ⅰ mRNA和蛋白相对表达量均较对照组升高(均P＜0.05),多西环素组细胞Fibronectin、Collagen Ⅰ mRNA和蛋白相对表达量均较模型组降低(均P＜0.05).与对照组相比,大鼠角膜碱烧伤后第7、第14天,多西环素组大鼠角膜混浊度评分更低(P＜0.05);HE染色图片,各个时间点多西环素组大鼠角膜基质结构更规整,第7天多西环素组上皮修复更佳、炎症细胞浸润更少.结论:多西环素可以抑制人角膜细胞分化为肌成纤维细胞,促进大鼠角膜碱烧伤后角膜愈合,减轻角膜瘢痕.