新型冠状病毒3C样蛋白酶的原核表达及其多克隆抗体的制备

目的 表达及纯化新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)3C 样蛋白酶(3-chymotrypsin-like protease,3CLpro)并制备3CLpro 多克隆抗体.方法 将重组质粒 pET28a-Proteinase_3CL-pro转化大肠埃希菌BL21(DE3),利用IPTG诱导重组蛋白表达,超声破碎后用SDS-PAGE凝胶分析蛋白表达情况,利用Ni-NTA进行重组蛋白的纯化.用重组蛋白免疫4～8周龄健康小鼠,制备多克隆抗体,通过Western blot和ELISA对抗体进行定性和定量检测.结果 重组蛋白His-3CLpro在重组菌培养上清中高表达,分子质量单位为33.8 ku.制备的多克隆抗体可特异结合重组蛋白3CLpro,ELISA检测血清抗体效价可达1 ∶ 204 800.结论 在大肠埃希菌中成功表达3CLpro,免疫小鼠并制备高效价的鼠抗3CLpro多克隆抗体,为研究3CLpro 功能进而开发新型冠状病毒检测试剂盒及治疗药物奠定了基础.