基于Notch通路探讨缺氧对小胶质细胞IL-1β表达的影响

目的:探讨缺氧后小胶质细胞Notch信号通路是否激活，及其对IL-1β表达的影响。方法:将BV-2小胶质细胞分为对照组、缺氧无糖培养组(oxygen glucose deprivation，OGD组)、及缺氧无糖培养+ 10 μmol/L DAPT组(DAPT组)；对照组细胞正常培养，OGD组、DAPT组缺氧培养4 h（含3% O 2, 5% CO 2, 92%N 2 培养箱中培养）后在正常培养箱中复氧24 h。先用CCK8分析10 μmol/L DAPT对BV-2小胶质细胞活性的影响；Western blot检测各组BV-2小胶质细胞中活化的Notch信号通路下游蛋白NICD的表达，以及免疫荧光法、RT-PCR、Western blot检测各组BV-2小胶质细胞IL-1β的表达。数据采用单因素方差分析，用LSD- t法进行组间两两比较， P<0.05为差异有统计学意义。 结果:CCK8检测OGD组及DAPT组的OD值分别为：0.269±0.013、0.265±0.025 ( P>0.05)；表明10 μmol/L DAPT对BV-2小胶质细胞活性无影响。Western blot提示：与对照组比较，OGD组与DAPT组BV-2小胶质细胞NICD蛋白表达明显增加；与OGD组比较，DAPT抑制Notch信号通路后BV-2小胶质细胞NICD蛋白表达明显减少（对照组：0.632±0.065，OGD组：1.276±0.049，DAPT组：0.938±0.049， P<0.05）。免疫荧光提示：对照组BV-2小胶质细胞少量表达IL-1β；OGD组与DAPT组BV-2小胶质细胞IL-1β的表达明显增加；与OGD组比较，DAPT组BV-2小胶质细胞IL-1β的表达明显减少。RT-PCR提示：与对照组比较，OGD组与DAPT组BV-2小胶质细胞IL-1β mRNA表达明显增加；与OGD组比较，DAPT组BV-2小胶质细胞IL-1β mRNA表达明显减少（对照组：1.000±0.173，OGD组：2.741±0.207，DAPT组：1.762±0.177， P<0.05）。Western blot提示：与对照组比较，OGD组与DAPT组BV-2小胶质细胞IL-1β蛋白表达明显增加；与OGD组比较，DAPT组BV-2小胶质细胞IL-1β蛋白表达明显减少（对照组：0.422±0.030，OGD组：1.236±0.143，DAPT组：0.730±0.047， P<0.05）。 结论:缺氧可激活小胶质细胞Notch信号通路，抑制Notch信号通路可减少缺氧小胶质细胞IL-1β的表达。