1α,25-二羟基维生素D3通过TLR4信号通路抑制川崎病血清诱导的THP-1细胞炎症因子表达

目的:研究1α,25-二羟基维生素D3[1,25-(OH)2D3]是否通过调控巨噬细胞Toll样受体4(TLR4)信号通路的活化影响川崎病炎症反应的发生.方法:收集襄阳市第一人民医院收治的73例川崎病患儿血清,另收集急性上呼吸道感染患儿(感染组)和儿保科体检儿童(对照组)的血清各30例,利用试剂盒检测各组25-羟基维生素D3[25-(OH)D3]水平的变化,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线,确定诊断截断点.体外细胞实验,利用采集的血清诱导THP-1巨噬细胞构建川崎病固有免疫模型,实验分组为:15％正常血清组、15％川崎病血清组及15％川崎病血清+1,25-(OH)2D3(1 nmol/L、10 nmol/L和100 nmol/L)组[1,25-(OH)2D3均于血清刺激前加入].加入血清刺激24 h后,利用RT-qPCR检测TLR4、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA表达水平,ELISA检测细胞培养上清液中TNF-α的含量;Western blot检测TLR4和p-P65的蛋白水平;免疫荧光技术检测TLR4蛋白的表达.结果:川崎病患儿体内白细胞数、中性粒细胞数、血小板数、丙氨酸转氨酶及C-反应蛋白均较感染组显著升高(P<0.05).与对照组及感染组相比,川崎病患儿血清25-(OH)D3水平显著降低(P<0.01),诊断截断点为27.55μg/L,ROC曲线下面积为0.922,预测的灵敏度为93.3％,特异度为75.0％.体外细胞实验显示,与正常血清组相比,川崎病血清可显著促进巨噬细胞TLR4、IL-1β和TNF-α的mRNA表达(P<0.05),增加巨噬细胞分泌TNF-α的含量(P<0.05);1,25-(OH)2D3预保护抑制血清诱导的炎症因子产生.川崎病血清显著提高巨噬细胞TLR4和p-P65蛋白水平(P<0.05),而1,25-(OH)2D3可显著抑制这一作用(P<0.05).结论:川崎病患儿体内25-(OH)D3水平显著降低,而补充1,25-(OH)2D3可通过调节TLR4信号通路来抑制川崎病血清诱导的THP-1细胞炎症反应.