借助自组装多肽水凝胶构建高活性复层结膜上皮细胞片

目的:评价RAD16-I自组装多肽水凝胶构建复层结膜上皮细胞片的效果,并探讨其作用机制.方法:酶消化法提取兔结膜上皮细胞(rCECs),倒置显微镜观察其形态,阿尔辛蓝-过碘酸-希夫染色检测杯状细胞,免疫荧光检测特异性蛋白细胞角蛋白4(CK4)和黏蛋白5AC(MUC5AC)的表达;磷脂酶脱细胞法制得脱细胞的细胞外基质(dcECM),用HE染色、免疫荧光染色及DNA含量检测评估脱细胞效率;基质复水率及降解率检测dcECM性质;用RAD16-I混合rCECs后种植于dcECM制得复层结膜上皮细胞片,探讨RAD16-I对结膜上皮细胞活力、增殖能力及胞间连接的影响.结果:(1)rCECs整体呈圆形或椭圆形铺路石样改变,特异性蛋白CK4和MUC5AC均为阳性;(2)磷脂酶脱细胞法充分去除异种细胞成分而完整保留天然细胞外基质,dcECM的复水率和降解率与天然结膜相比无显著差异;(3)细胞片检测可见RAD16-I能够增强细胞活力、增殖能力、黏附能力及细胞复层能力.结论:RAD16-I可以促进细胞快速复层,该过程可能与其增强细胞的活力、增殖能力及胞间连接有关.