鸡蛋中泰妙菌素化学发光酶免疫分析方法研究

针对鸡蛋中泰妙菌素的残留问题,通过半抗原及抗原设计合成、动物免疫及细胞融合筛选,成功得到可特异、灵敏识别泰妙菌素的单克隆抗体,并建立了泰妙菌素的化学发光酶免疫分析方法(CLEIA).采用棋盘法结合单因素实验优化策略,确定最佳反应条件为:包被原质量浓度0.26μg/mL,抗体质量浓度0.94μg/mL,反应体系为0.02 mol/L的PBS(pH 7.4)缓冲液,酶标二抗质量浓度及其稀释液和反应时间分别为2μg/mL、PBST和40 min.在该条件下,建立了泰妙菌素的CLEIA方法,其IC50为0.54 ng/mL,检出限(LOD,IC10)为0.03 ng/mL,线性检测范围(IC20～IC80)为0.17～1.74 ng/mL,且与其它功能结构类似物无明显交叉反应,特异性良好.将建立的CLEIA方法用于鸡蛋实际样品的检测,加标回收率为100％～118％,相对标准偏差(RSD)小于10％,结果与HPLC-MS/MS(r2=0.9987)一致,表明该方法适用于鸡蛋样品中泰妙菌素残留的快速筛查.