颗粒蛋白前体在矽肺模型中的表达及其对肺成纤维细胞增殖与分化的影响

目的 探讨颗粒蛋白前体(progranulin,PGRN)在矽肺小鼠模型中的表达,及其对人肺成纤维细胞(human pulmonary fibroblast,HPF)增殖和分化的影响,并研究其机制.方法 在小鼠体内建立矽肺模型,利用RT-qPCR和免疫组化法检测肺组织中PGRN的mRNA和蛋白表达;在体外,利用CCK-8实验检测PGRN对HPF细胞增殖的影响,利用 RT-qPCR 检测 HPF 细胞 Ⅰ 型胶原 α1 链(collagen type Ⅰ alpha 1 chain,co/lal),Ⅲ 型胶原 α1 链(collagen type Ⅲalpha 1 chain,col3a1)、纤维连接蛋白(fibronectin,fn)的mRNA表达;western blot检测HPF细胞增殖相关信号通路ERK1/2-p-ERK1/2、分化相关蛋白纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的表达;细胞免疫荧光检测PGRN对HPF细胞FN蛋白表达的影响.结果 在矽肺小鼠模型中,RT-qPCR结果显示在肺组织中PGRN的mRNA水平升高(t=6.646,P＜0.001),蛋白水平升高(t=8.278,P＜0.001).与对照组比较,外源性PGRN作用48 h促进HPF细胞增殖(F=34.835,P＜0.001),1.0 μg/ml PGRN 上调 collal mRNA 表达 1.10倍(i=4.867,P=0.040),col3al mRNA 表达 1.14倍(t=6.733, P=0.021)、fn mRNA 表达2.85倍(t=11.684,P=0.007);0.5 pg/ml PGRN 组的 p-ERK1/2蛋白表达上调 1.9倍(q=24.663,P＜0.001),FN 蛋白上调 1.1 倍(q=7.206,P＜0.001);1.0 μg/ml PGRN 组的 p-ERK1/2蛋白表达上调2.7倍(q=47.243,P＜0.001),FN蛋白上调1.5倍(q=32.997,P＜0.001),呈剂量依赖趋势.免疫荧光实验也证实PGRN促进HPF细胞FN蛋白表达升高.结论 PGRN在矽肺中高表达,并促进肺成纤维细胞增殖和分化,提示PGRN可能是参与矽肺纤维化进展的重要细胞因子.