利用CRISPR/Cas9系统构建水通道蛋白9基因敲除小鼠

目的 利用CRISPR/Cas9系统敲除小鼠水通道蛋白9(AQP-9)基因,构建稳定敲除AQP-9基因的纯合子AQP-9-/-小鼠.方法 根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,在Ensembl数据库上找到AQP-9基因序列的外显子区域,综合分析选定AQP-9-202的公共外显子2,前期在其两边设计7个小向导RNA (sgRNA)靶点,选择合适靶点,将AQP-9敲除.用PCR以及基因测序手段检测基因敲除效果.获得F1代杂合子小鼠后,继而提供10只野生型小鼠(雌雄各5只)进行繁育,以期得到纯合子AQP-9-/-小鼠.结果 前期设计的7个sgRNA靶点基因活性均在95％以上,选择L2和R2作为最终的sgRNA靶点.注射受精卵74枚,移植60枚,得到6只F0代阳性鼠.经过繁育鉴定,最终得到稳定敲除AQP-9基因的纯合子AQP-9-/-小鼠.结论 利用CRISPR/Cas9系统获得全身敲除AQP-9基因且可稳定遗传的纯合子AQP-9-/-小鼠.