山东省新型冠状病毒分离与全基因组进化分析

目的:建立新型冠状病毒(2019 novel coronavirus，2019-nCoV)的细胞培养和全基因组测序方法，了解2019-nCoV基因变异情况。方法:选取部分2019-nCoV感染的肺炎确诊病例的鼻、咽拭子标本接种Vero-E6细胞培养管进行分离培养，逐日观察病变，对病变的细胞开展荧光定量RT-PCR检测确认病毒分离结果；选取部分分离到的新型冠状病毒进行10倍稀释后接种细胞测定病毒滴度。采用2019-nCoV全基因组捕获技术及二代测序方法对部分分离到的毒株进行全基因组测序，对获得的序列进行序列比对和进化分析，分析其变异位点。结果:在生物安全三级实验室建立2019-nCoV在Vero-E6细胞系中的病毒分离方法，共对150份2019-nCoV阳性病例鼻、咽拭子标本开展病毒分离，共分离到22株2019-nCoV毒株。对其中的18株2019-nCoV开展全基因组测序，获得的基因组序列全长约为29 600 bp，基因同源性在99.9%以上，共有43个核苷酸和24个氨基酸位点发生了变异。基因进化分析显示，分离到的病毒分为L型和S型分支，在L型分支中，又包含了欧洲家系I型和II.1型分支。结论:通过Vero-E6细胞成功分离培养了2019-nCoV，并分析了其基因变异规律，为病例的溯源、药物筛选、生物学特性研究等工作提供了基础。同时，持续开展2019-nCoV分离和全基因组测序分析对后续的新冠肺炎防控及变异毒株的监测也至关重要。