虎α干扰素与虎白蛋白融合蛋白的表达与鉴定

目的 通过杆状病毒表达系统表达虎干扰素蛋白及其融合白蛋白后的长效干扰素蛋白.方法 合成虎a干扰素基因IFN-α和融合虎白蛋白的长效干扰素基因IFN-α+ALB,经双酶切和酶连后转化大肠埃希菌DH5α获得重组质粒,鉴定正确后转化DH10Bac感受态,经蓝白斑筛选获得重组杆状病毒质粒,测序验证后转染昆虫细胞Sf9,并进行盲传.提取P3代细胞的上清基因组,检测目的 基因表达情况并大量培养.收集细胞,超声破碎,取上清,经镍柱纯化后获得蛋白IFN-a和IFN-α+ ALB,用SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白的表达.并通过MDCK-H5N1系统进行重组蛋白的体外活性验证试验.结果 构建的重组杆状病毒质粒测序验证正确,转染昆虫细胞Sf9后表达分子质量与预期相一致的两种蛋白,其体外活性试验显示长效干扰素抗病毒效果更好.结论 成功构建了虎长效干扰素重组质粒,表达的IFN-α融合虎白蛋白具有长效干扰素作用,为进一步研究对比其与干扰素蛋白的功能奠定了基础.