凝血酶亲和色谱法测定隐丹参酮、二氢丹参酮Ⅰ及丹参酮ⅡA与凝血酶间的平衡解离常数

目的 通过凝血酶亲和色谱前沿分析计算阿加曲班、隐丹参酮、二氢丹参酮Ⅰ及丹参酮ⅡA四种化合物与凝血酶之间的平衡解离常数(KD).方法 制备凝血酶亲和色谱柱(10 mm×2.0 mm,5μm),4种化合物浓度由低到高依次通过色谱柱,制作突破曲线,记录拐点时间.根据前沿色谱理论,以1/[L]m对1/mL作图,回归曲线斜率和截距之比即为KD.结果 阿加曲班的平衡解离常数为(6.95±0.61)×10-9mol·L-1,与文献报道的数据5.0nmol·L-1接近.隐丹参酮、二氢丹参酮Ⅰ及丹参酮ⅡA的平衡解离常数分别为(13.49±0.92)×10-9、(3.24±0.32)×10-9和(2.88±0.31)×10-9 mol·L-1.亲和强度顺序为:隐丹参酮＜阿加曲班＜二氢丹参酮Ⅰ＜丹参酮ⅡA.结论 本法可用于药物与凝血酶间平衡解离常数KD值的计算.