过滤对超速离心法提取外泌体的影响

目的 明确过滤对超速离心法提取外泌体数量及纯度的影响,为当前外泌体的提取方法提供一定参考.方法 收集健康人血浆和肺癌PC-9/IR细胞培养上清,分为未过滤组(unfiltration group,NC)和过滤组(filtration group,GL),过滤组采用0.22μm过滤器过滤.超速离心法提取外泌体,纳米颗粒跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)检测过滤前后纳米颗粒(外泌体)数量及粒径大小变化,Aminis成像流式检测过滤前后CD9+外泌体(CD9+exosomes,CD9+Exo)和CD63+外泌体(CD63+exosomes,CD63+Exo)数量及百分比.结果 NTA结果显示,与NC组相比,血浆过滤后外泌体数量下降4.7倍,培养上清过滤后外泌体数量下降2.5倍.Aminis成像流式结果显示,血浆中CD9+Exo和CD63+Exo的数量过滤后分别下降了5倍和2.6倍,培养上清中CD9+Exo和CD63+Exo的数量过滤后分别下降了3倍和2.3倍,差异均有统计学意义(P<0.05).同时,Aminis成像流式结果显示,过滤后颗粒中CD9+Exo和CD63+Exo的百分比没有提高,差异无统计学意义.结论 过滤降低了超速离心法提取外泌体的数量,并未提高外泌体的纯度.