3-O-C12-HSL通过抑制lncRNA CD48-AS和CD48的表达而阻碍Mo-DCs成熟

目的 筛选并阐明长链非编码RNA(lncRNA)CD48-AS与其反义互补分子CD48 mRNA在N-3-氧代十二烷酰-L-同型丝氨酸内酯(3-O-C12-HSL)阻碍人单核细胞诱导的树突状细胞(Mo-DCs)成熟过程中发挥作用的机制.方法 从健康人外周血中分离Mo-DCs,将未成熟的Mo-DCs细胞分为阴性对照组(0.1％DMSO)、脂多糖(LPS)阳性对照组(100μg/L的LPS)和实验组(100μg/L LPS+40μmol/L 3-O-C12-HSL)进行lncRNA芯片检测.筛选lncRNA表达谱中差异表达5倍以上的自然反义lncRNA进行聚类分析,从中筛选差异具有统计学意义的自然反义lncRNA CD48-AS.未成熟的Mo-DCs分为阴性对照组、LPS阳性对照组以及LPS+C5、C10、C25实验组(分别加入5、10、25μmol/L的3-O-C12-HSL).利用荧光定量PCR检测lncRNA CD48-AS和反义分子CD48 mRNA在实验体系中的表达水平;通过生物信息学分析lncRNA CD48-AS与CD48反义互补区及其蛋白编码功能;通过核糖核酸酶保护实验(RPA)验证lncRNA CD48-AS是否与CD48形成二聚体,从而通过影响靶CD48的表达来发挥调控作用.最后检测lncRNA CD48-AS在细胞内的定位.结果 3-O-C12-HSL处理Mo-DCs后lncRNA表达谱出现了特异性改变.3-O-C12-HSL可下调由LPS诱导的Mo-DCs中lncRNA CD48-AS及其反义靶分子CD48的表达.生物信息学分析lncRNA CD48-AS不具备蛋白编码功能,为非编码RNA;lncRNA CD48-AS与CD48形成RNA二聚体从而减少RNA酶对CD48 mRNA的降解,使得CD48 mRNA表达增加;lncRNA CD48-AS在Mo-DCs中主要定位在细胞核中,细胞质中表达量较少.结论 3-O-C12-HSL可通过下调lncRNA CD48-AS,进而影响CD48的表达来阻碍Mo-DCs的成熟.