基于药效权重评价的杜仲叶-刺五加复方"湿法超微提取-膜澄清耦合"工艺筛选研究

目的 基于对湿法超微粉碎提取与膜澄清耦合工艺的研究,用细胞存活率及细胞上清液中炎症因子水平筛选提取工艺,并以杜仲叶-刺五加提取液的免疫、抗炎效应对所筛选的工艺进行验证.方法 根据杜仲叶-刺五加提取液的体外抗炎实验结果,筛选杜仲叶与刺五加的比例、提取方法(传统热回流提取工艺和湿法超微粉碎提取)、湿法超微粉碎提取时间和膜澄清耦合的影响等提取条件,用MTT法测定细胞存活率,并分析杜仲叶与刺五加提取物对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7增殖和抗炎活性的影响.结果 以免疫调节和抗炎药理效应筛选的杜仲叶-刺五加提取的2种工艺产物表明,湿法超微粉碎提取工艺优于传统热回流方法提取,该工艺下的杜仲叶-刺五加提取液对LPS诱导RAW264.7细胞炎症具有良好的抑制作用,可降低炎症细胞上清液中一氧化氮(nitric oxide,NO)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6水平,能降低M1型巨噬细胞标志物诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达,增加M2型巨噬细胞标志物Arginase表达,增加M1型和M2型巨噬细胞的吞噬作用.结论 通过湿法超微粉碎提取与膜澄清耦合制备的杜仲叶-刺五加提取液可以调节炎症过程中的相关细胞因子,从而产生积极的免疫调节和抗炎作用.在体外抗炎实验的药效权重评价基础上,验证了湿法超微粉碎提取与膜澄清耦合可以对杜仲叶-刺五加进行有效提取,为中药新药研发中绿色提取技术应用方面提供了新思路.