利用CRISPR/Cas9技术构建斑马鱼Hand2基因敲除模型

心脏神经脊衍生物表达转录因子2(Hand2)是bHLH家族的成员,也称为dHand、Hed和Thing2,可在人以及鼠、鸡、斑马鱼、果蝇等模式动物中表达.国内外的研究显示,Hand2主要影响右心室的发育,在维持右心室祖细胞和右心室形态发生中起关键作用.为了进一步研究Hand2基因参与心脏发育的作用机制,拟通过CRISPR/Cas9基因编辑技术构建斑马鱼Hand2基因敲除品系.根据生物信息学网站的分析筛选出最优的两个靶位点,设计并合成引物,利用PCR扩增得到Hand2基因sgRNA的cDNA,再转录为mRNA,将两个靶位点sgRNA的mRNA和Cas9蛋白共同注射到斑马鱼胚胎的Ⅰ-细胞期.在斑马鱼的胚胎和成鱼时期进行基因敲除的有效性检测,发现在靶位点附近有碱基的缺失和插入,表明CRISPR/Cas9对斑马鱼Hand2基因敲除是有效的.本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建了斑马鱼的Hand2基因敲除模型,为后期研究Hand2基因在人类疾病中的作用机制和新型治疗靶点的临床开发等奠定了基础.