猪源肠外致病性大肠杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立

利用制备的猪源肠外致病性大肠杆菌(ExPEC)全菌体蛋白建立一种检测猪源ExPEC抗体的间接ELISA方法.将2株猪源ExPEC SDjie18-10(O38)、HByan18-2(O127)超声裂解的全菌体蛋白作为包被抗原,对反应条件进行优化,建立检测猪源ExPEC抗体的间接ELISA方法,并进行临床应用与评价.该方法的最佳条件:包被抗原浓度为15μg/mL,37℃1 h+4℃过夜;2％BSA于37℃封闭2 h;血清稀释度为1:800,37℃孵育30 min;酶标二抗稀释度为1:5000,37℃作用30 min;显色时间为37℃15 min.该方法可特异性检测猪源ExPEC抗体,阳性血清稀释至1:6400仍可检出,与其他猪病原阳性血清均无交叉反应,批内及批间变异系数均小于10％.应用间接ELISA与MAT进行符合性比较及临床猪血清样品感染抗体的同步检测,两种方法的符合率分别为93.33％和94.50％且无显著性差异(P>0.05),具有较高的均一性,同时间接ELISA的感染抗体阳性检出率(19.00％)略高于MAT(17.50％),两者检测结果高度一致(K=0.816).基于猪源ExPEC全菌体蛋白建立的猪源ExPEC抗体间接ELISA检测方法,具有良好的特异性、敏感性和重复性以及临床应用的可靠性,可用于猪源ExPEC的免疫监测和流行病学调查.