基于UPLC-MS法快速定量检测人血浆中短链脂肪酸

目的:建立一种3-硝基苯肼化学衍生化与UPLC-MS联用技术的快速检测人血浆中短链脂肪酸(SCFAs)含量的方法.方法:用5倍量的甲醇沉淀蛋白后,上清液中加入3-硝基苯肼(3-NPH)与EDC进行衍生化反应,通过考察反应时间、温度、反应物浓度对衍生化产物峰面积的影响,优化反应条件.采用Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱,以乙腈-甲醇(V(乙腈)︰V(甲醇)=2︰1)及水(含0.1％甲酸)为流动相,分离11个SCFAs.采用ESI离子源,多反应监测正离子模式进行检测.结果:最佳反应条件为25 mmol·L?13-NPH作为衍生化试剂和30 mmol·L?1 EDC作为催化剂,40℃反应30 min;11个SCFAs在11 min内能实现基线分离;衍生化产物的峰面积与浓度有良好的线性关系(r>0.999),日内与日间精密度良好(RSD均小于15％),提取回收率在80％～120％范围内.结论:衍生化方法反应条件温和、操作简单;UPLC-MS/MS方法准确、简易、可重复,可用于人血浆中SCFAs的含量测定.