铅致大鼠心肌细胞损伤中蛋白激酶C对缝隙连接蛋白43表达的调控作用

目的 研究醋酸铅染毒大鼠心肌细胞株(H9c2)后蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)、缝隙连接蛋白43 (connexin 43,Cx43)及其磷酸化蛋白的表达变化,探讨心肌损伤过程中PKC对Cx43的调控作用.方法 (1)将对数生长期H9c2随机分组,以醋酸铅0、5、10、20 μmol/L梯度浓度处理细胞12 h.(2)将对数生长期H9c2细胞随机分为对照组、醋酸铅组、醋酸铅+佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)组和PMA组.PMA预处理后的醋酸铅+PMA组、醋酸铅组细胞均给予10 μmol/L醋酸铅染毒12 h,PMA组不予染毒.(3)检测各组H9c2细胞培养上清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测各组H9c2细胞内Cx43、PKC蛋白相对表达含量及s368位点的Cx43磷酸化水平.结果 10、20 μmol/L醋酸铅染毒的H9c2细胞存活率较对照组明显降低(P＜0.05);10、20 μmol/L醋酸铅组H9c2细胞培养液LDH活性较对照组显著升高(P＜0.05);5、10、20 μmol/L醋酸铅组Cx43、p-Cx43e368、PKC蛋白相对表达含量与对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05),且呈浓度依赖性降低;20 μmol/L醋酸铅组p-Cx43/Cx43显著低于对照组(P＜0.05).与对照组相比,醋酸铅组、醋酸铅+PMA组H9c2细胞培养液LDH活性显著升高(P＜0.05),醋酸铅+PMA组细胞培养液LDH活性显著低于醋酸铅组(P＜0.05).与对照组相比,醋酸铅组、醋酸铅+PMA组细胞内Cx43蛋白相对表达含量降低,差异均有统计学意义(P＜0.05);醋酸铅+PMA组Cx43蛋白相对表达含量显著高于醋酸铅组(P＜0.01).结论 铅致心肌细胞损伤机制可能与PKC、Cx43及其磷酸化蛋白表达降低有关,PKC信号通路对Cx43表达具有调控作用.