猪细小、猪伪狂犬和猪繁殖与呼吸综合征病毒三重RT-qPCR检测方法的建立及初步应用

针对猪细小(PPV)、猪伪狂犬(PRV)和猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)病毒的保守区域设计用于构建荧光定量PCR体系的引物和探针.以构建的重组质粒标准品为模板建立三重荧光定量PCR体系,并对三重荧光定量PCR体系进行优化并进行特异性、灵敏性、重复性等试验.最后利用构建的三重荧光定量PCR体系和普通PCR体系分别检测病料以进行比较.结果表明:三种病毒在单重和三重荧光定量PCR体系中均无非特异性扩增;三种病毒在单重和三重荧光定量PCR体系中的灵敏度均可达到10 copies/μL;单重和三重荧光定量PCR体系组内和组间重复性变异系数均在5％以内;单重和三重荧光定量PCR在稀释度范围内呈现良好的线性关系.应用本研究构建的三重荧光定量PCR体系对164份临床组织样品进行检测,其中PPV阳性检出率为16.7％,PRV阳性检出率为10％,PRRSV阳性检出率为18.9％;普通PCR检测中PPV阳性检出率为6.5％,PRV阳性检出率为3.6％,PRRSV阳性检出率为7.5％.说明本研究建立的PPV、PRV和PRRSV三重荧光定量PCR检测方法符合临床检测要求并且比普通PCR方法更敏感、更特异.