氧化应激介导STAT3/p53通路调控邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯诱导的小鼠初级精母细胞凋亡

目的 研究氧化应激在邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯(mono-2-ethylhexyl-phthalate,MEHP)诱导小鼠初级精母细胞(GC-2spd)毒性中的作用及机制.方法 将培养的GC-2spd细胞分为对照组(含0.1％二甲基亚砜的无血清培养基)、MEHP染毒组(1、10、100 μmol/L MEHP 3个不同剂量组)、N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)预处理组(100 μmol/L NAC+100 μmol/L MEHP),MEHP 染毒24h,NAC预处理2h,NAC的预处理浓度(100 μmol/L)通过CCK-8实验确定.采用DCFH-DA探针法检测细胞内活性氧(reactive oxide species,ROS)水平,JC-1法检测线粒体膜电位,Western blot法检测细胞内线粒体凋亡通路相关蛋白和p-STAT3Tyr705、P53蛋白表达水平.结果 随着MEHP染毒剂量升高,细胞内代表活性氧水平的绿色荧光信号增多;不同剂量MEHP染毒组的线粒体膜电位均下降,表现为红绿荧光细胞比例比值减小,10和100μmol/L MEHP染毒组的红绿荧光细胞比例比值分别为5.15±1.68和4.09±1.72,明显低于对照组(7.91±1.24)(P＜0.05);促凋亡蛋白Bax与抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平比值(Bax/Bcl-2)在1、10、100 μmol/L MEHP染毒组分别为 1.23±0.17、2.64±0.43和4.75±0.73,与对照组(0.52±0.11)相比明显增加(P＜0.05);cytochrome C 蛋白表达水平在 100 μmol/L MEHP 染毒组升高为0.83±0.09,cleaved caspase-9蛋白表达水平在10和100 μmol/L MEHP染毒组升高为0.41±0.03和0.52±0.09,cleaved caspase-3蛋白表达水平在 10和 100 μmol/L MEHP 染毒组升高为0.60±0.12和0.84±0.17,与对照组相比差异均具有统计学意义(P＜0.05);STAT3/p53通路中,p-STAT3Tyr705蛋白表达水平在10和100 μmol/L MEHP染毒组分别下降为0.70±0.14和0.41±0.04,P53蛋白表达水平在10和100 μmol/L MEHP染毒组分别升高为1.32±0.05和1.66±0.22,与对照组相比差异均具有统计学意义(P＜0.05);NAC预处理后,与100 μmol/L MEHP组相比,NAC预处理组ROS生成减少,线粒体膜电位升高为5.92±1.64,Bax/Bcl-2下降为 1.92±0.06,cytochrome C、cleaved caspase-9和 cleaved caspase-3蛋白表达水平分别下降为0.57±0.07、0.35±0.04和0.53±0.06,p-STAT3Tyr705蛋白表达水平升高为0.86±0.07,P53蛋白表达水平下降为1.01±0.06,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 MEHP诱导GC-2spd细胞凋亡可能与ROS介导的STAT3/p53通路调控线粒体凋亡通路有关.