弓形虫ROP16蛋白在人白血病细胞THP-1表达及对其细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨弓形虫Ⅱ型(Me49)ROP16蛋白在急性单核细胞白血病细胞株THP-1中的表达及其对THP-1细胞增殖与凋亡的影响.方法 构建过表达ROP16(overExp-ROP16)和空载体(overExp-NC)慢病毒,通过转染THP-1细胞,72 h后观察荧光表达情况,采用PCR与Western blot验证ROP16在THP-1细胞中的表达.免疫荧光技术检测ROP16蛋白在THP-1细胞中的定位.CCK-8与流式细胞术检测细胞增殖及凋亡.采用qRT-PCR检测细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA 相对表达水平.Western blot 检测 Bax、Bcl-2、Pro-Caspase-3和 Cleaved-Caspase-3蛋白的表达变化.结果 构建的过表达ROP16重组慢病毒转染到THP-1细胞后,可观察强荧光信号,ROP16蛋白在THP-1细胞中成功表达.免疫荧光结果表明ROP16蛋白定位于THP-1细胞核.CCK-8与流式细胞术证实ROP16蛋白抑制THP-1细胞的增殖并促进其凋亡(均P＜0.05).与对照组相比,过表达组促凋亡因子Bax、Caspase-3 mRNA高表达(P＜0.05),抗凋亡因子Bcl-2 mRNA低表达(P＜0.01),Bax 与 Cleaved-Caspase-3蛋白水平上调(P＜0.01),Bcl-2与 Pro-Caspase-3 蛋白水平下调(P＜0.01).结论 构建的慢病毒表达质粒overExp-ROP16可在急性单核细胞白血病细胞株THP-1中表达且通过入核调节凋亡蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3而抑制THP-1细胞增殖,促进其凋亡.