A型肉毒毒素预防小鼠慢性偏头痛发作的机制研究

目的:评价A型肉毒毒素(BoNT/A)预防小鼠慢性偏头痛(CM)发作的疗效并探讨其分子机制。方法:24只C57BL/6雄性小鼠按随机数字表法分为对照组( n=8)、模型组( n=8)、BoNT/A预防组( n=8)。后2组小鼠均于第1、3、5、7、9天腹腔注射10 mg/kg硝酸甘油(NTG)建立CM模型，BoNT/A预防组小鼠于首次注射NTG前1 h先注射0.18 U/100 μL BoNT/A，对照组注射等剂量生理盐水。第1、3、5、7、9天采用von Frey纤维丝测痛仪检测小鼠足底和口面部机械痛阈的基础值及NTG注射后2 h诱发的急性机械痛阈值；第1、3、5、7、9天注射NTG后2 h采用转棒实验测试小鼠的运动功能；第9天采用Western blotting检测小鼠三叉神经节(TG)、三叉神经脊束核尾核(TNC)中降钙素基因相关肽(CGRP)、裂解突触小体相关蛋白25(SNAP25)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、瞬时受体电位通道蛋白，TNC中NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎性因子通路相关蛋白的表达；实时荧光定量PCR(PT-qPCR)检测小鼠TNC中NLRP3炎性因子通路相关mRNA的表达；免疫荧光染色检测小鼠TNC中CGRP的表达。 结果:(1)与对照组比较，模型组小鼠第7、9天口面部机械痛阈的基础值降低；与模型组比较，BoNT/A预防组小鼠第7、9天口面部机械痛阈的基础值增加，差异均有统计学意义( P<0.05)。与对照组比较，模型组小鼠第5、9天口面部急性机械痛阈值降低；与模型组比较，BoNT/A预防组小鼠第5、9天口面部急性机械痛阈值增加，差异均有统计学意义( P<0.05)。与对照组比较，模型组小鼠第3、5、7、9天足底机械痛阈的基础值和急性机械痛阈值均降低；与模型组比较，BoNT/A预防组小鼠第3、5、7、9天足底机械痛阈的基础值和急性机械痛阈值均增加，差异均有统计学意义( P<0.05)。(2)转棒实验结果显示，3组小鼠在转棒上跑动时间的差异无统计学意义( P>0.05)。(3)Western blotting检测结果显示，与对照组比较，模型组小鼠TG中CGRP、SNAP25蛋白的表达增加；与模型组比较，BoNT/A预防组小鼠TG中CGRP、SNAP25蛋白的表达降低，差异均有统计学意义( P<0.05)。与对照组比较，模型组小鼠TNC中CGRP蛋白的表达增加；与模型组比较，BoNT/A预防组小鼠TNC中CGRP蛋白的表达降低，差异均有统计学意义( P<0.05)。与对照组比较，模型组小鼠TNC中NLRP3蛋白的表达增加；与模型组比较，BoNT/A预防组小鼠TNC中NLRP3蛋白的表达降低，差异均有统计学意义( P<0.05)。(4)RT-qPCR检测结果显示，与对照组比较，模型组小鼠TNC中 IL-1β mRNA的表达增加；与模型组比较，BoNT/A预防组小鼠TNC中 IL-1β mRNA的表达降低，差异均有统计学意义( P<0.05)。(5)免疫荧光染色检测结果显示，与对照组比较，模型组小鼠TNC中CGRP的表达增加；与模型组比较，BoNT/A预防组小鼠TNC中CGRP的表达降低，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:BoNT/A可以降低TG中SNAP25的表达，减少CGRP在TG和TNC的释放，预防CM的发作；BoNT/A具有调控TNC中NLRP3水平的作用。