基于N蛋白的牛冠状病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用

为建立牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)抗体间接ELISA检测方法,对BCoV的N基因进行克隆,利用原核表达制备重组N蛋白,以纯化的重组N蛋白作为包被抗原,建立ELISA检测方法,并对随机收集的奶牛血清样本进行检测.结果显示,重组N蛋白大小为50 ku,经Western blot鉴定重组N蛋白具有良好的反应原性;建立的ELISA检测方法抗原包被量为1.5μg/mL,血清以1:50稀释,酶标二抗以1:10000稀释,临界值为0.256.用该方法检测牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、口蹄疫病毒阳性血清均无交叉反应;当BCoV标准阳性血清1:2560稀释时检测结果仍为阳性,灵敏性较好;批内和批间变异系数分别为1.83％～5.80％和2.34％～7.45％.对陕西省部分牛场收集的296份牛血清进行检测,BCoV抗体阳性率为18.24％.建立了一种快速检测BCoV抗体的间接ELISA方法,为BCoV的实验室诊断和流行病学调查提供了技术支持.