金黄色葡萄球菌侵染对奶牛乳腺上皮细胞Nrf2和NF-κB信号通路转导的影响

金黄色葡萄球菌(S.aureus)是奶牛乳腺炎的主要致病菌之一,严重影响奶牛的生理健康和生产性能.本试验使用S.aureus侵染奶牛乳腺上皮细胞(BMECs),观察S.aureus侵袭对BMECs的NF-κB和Nrf2信号通路转导,及炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-8表达的影响.采用S.aureus按MOI =1:1侵染BMECs,在不同的时间点分别使用荧光定量PCR检测Nrf2通路关键基因Nrf2、Keap1、NQO-1与炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-8的mRNA表达水平;Western blot检测Nrf2和NF-κB信号通路关键蛋白Nrf2、p65、P-p65、IκBα、P-IκBα的表达.结果显示:Nrf2和NQO-1基因mRNA表达量在感染后2,4 h显著或极显著升高(P＜0.05或P＜0.01),且Nrf2在感染后6,8 h时极显著下降(P＜0.01);Keap1基因mRNA表达量在感染后2,4 h时显著或极显著下降(P＜0.05或P＜0.01),且在感染后8h时显著升高(P＜0.05).炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-8基因mRNA表达在感染后1,2,3,4,6,8 h时均显著或极显著升高(P＜0.05或P＜0.01).Western blot结果显示:Nrf2蛋白表达量在感染后2h时显著升高(P＜0.05),且在感染后6,8 h时显著或极显著下降(P＜0.05或P＜0.01);p65蛋白磷酸化水平在感染后0.5,1,2,3,4,5,6h时显著或极显著升高(P＜0.05或P＜0.01);IκBα蛋白磷酸化水平在感染后1,2,3,4 h时显著或极显著升高(P＜0.05或P＜0.01).结果表明,S.aureus侵染BMECs后,通过激活Nrf2和NF-κB信号通路,促进炎性细胞因子表达,参与S.aureus侵袭BMECs的进程,为金黄色葡萄球菌性乳腺炎的防治提供新的思路.