表达猪δ冠状病毒S1蛋白植物乳杆菌的构建及验证
Chinese Journal of Veterinary Science（2021）
摘要
本研究拟构建猪δ冠状病毒(PDCoV) S1蛋白的重组植物乳杆菌.通过PCR方法扩增含1320信号肽和DCpep优化的PDCoV S1基因,利用无缝克隆技术将扩增片段克隆至植物乳杆菌表达载体pSIP411,并将pSIP411电转至宿主乳酸乳球菌NZ3900,扩增后提取质粒并验证,获得重组质粒NZ3900:pSIP411-PDCoV S1.将重组质粒电转入植物乳杆菌LP18,获得重组植物乳杆菌LP18:pSIP411-PDCoV S1,对诱导时间、诱导剂质量浓度、诱导温度等表达条件进行优化,以获得最佳表达条件.结果 显示,成功扩增出1939 bp经过修饰和优化的目的 基因PDCoV S1,成功构建了重组植物乳杆菌LP18:pSIP411-PDCoV S1.Western blot、流式细胞术、免疫荧光等检测方法表明重组蛋白能够在重组植物乳杆菌中表达,最佳表达条件:诱导时间为6h、诱导剂质量浓度为150 μg/L、诱导温度为33℃.本试验成功构建了1株高表达PDCoV S1蛋白的植物乳杆菌,为PDCoV口服候选疫苗的研制奠定基础.
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