锡兰钩虫SLP-1基因的克隆表达与免疫学特性分析

为了研究锡兰钩虫鞘脂激活蛋白样蛋白(Ace-SLP-1)的免疫学特性,本研究以锡兰钩虫成虫cDNA为模板,根据GenBank中Ace-SLP-1基因序列(DQ855414.1)设计特异性引物,采用RT-PCR扩增Ace-SLP-1基因,结果显示,PCR扩增了Ace-SLP-1基因,其ORF全长315bp,编码104个氨基酸;利用在线软件对其编码蛋白的氨基酸序列进行生物信息学分析,结果显示该蛋白为疏水蛋白,前17个氨基酸为信号肽序列且有跨膜结构域等;根据Ace-SLP-1基因编码氨基酸序列信息将其成熟肽编码基因序列(Ace-XL-SLP-1)克隆至原核表达载体pET-28a中,构建的重组质粒鉴定正确后转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,SDS-PAGE检测结果显示重组Ace-XL-SLP-1蛋白(rAce-XL-SLP-1)以包涵体形式表达,分子质量为14.4 ku;Western blot结果显示,该重组蛋白可以分别被鼠His标签MAb及锡兰钩虫感染犬的阳性血清所识别,具有较好的反应原性.将rAce-XL-SLP-1分别以0～40 μg/mL体外刺激健康犬的外周血淋巴细胞(PBMC),采用CCK-8试剂盒检测其对PBMC增殖的影响,结果显示,与对照组相比,20 μg/mL与40 μg/mL的rA4ce-XL-SLP-1均可显著刺激犬PBMC的增殖(P＜0.05),表明该重组蛋白能够诱导宿主细胞产生免疫应答反应,免疫原性较好.本研究首次克隆表达了锡兰钩虫成虫Ace-XL-SLP-1基因,并对其免疫学特性做了初步研究,为锡兰钩虫血清学诊断方法的建立和疫苗的研制提供参考数据.