检测猫杯状病毒RT-qPCR方法的优化与应用

为建立一种通用性良好的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法,根据GenBank上猫杯状病毒(feline calicivir-us,FCV) ORF1保守区域序列,设计合成1对特异性引物,用于FCV的快速检测.灵敏性试验结果显示,该方法的检测下限为4.93×101拷贝/μL,比普通RT-PCR检测下限高100倍;特异性试验结果显示,该检测方法与猫疱疹病毒、猫细小病毒、猫传染性腹膜炎病毒等无交叉反应;通用性试验结果显示,针对引物靶位点区间,该方法对所有已知变异位点的人工合成质粒和本实验室保存的不同变异位点的FCV毒株,均能够良好检出;重复性试验结果显示,组内的变异系数为0.09％～0.71％,组间变异系数为0.05％～0.82％,均小于1％.对23份临床样品进行检测,该方法的阳性检出率为60.9％,检出的14份阳性病料分别接种到CRFK细胞中,对细胞病变产物进行扩增并测序,BLAST对比后结果证实为FCV毒株.结果 表明,本试验建立的荧光定量RT-PCR检测方法可用于FCV的快速诊断及流行病学的调查.