基于P18蛋白基因的新型鸭呼肠孤病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立
Jiangsu Journal of Agricultural Sciences（2021）
摘要
根据新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)特有的非结构蛋白P18基因保守序列设计1对特异性引物,建立了NDRV荧光定量RT-PCR检测方法.用该方法和普通RT-PCR方法对239份临床样品进行检测,NDRV阳性检出率分别为23.85％(57/239)和17.57％(42/239),荧光定量RT-PCR检测方法的检出率明显高于普通RT-PCR检测方法.随机取5份荧光定量RT-PCR检测方法检测的阳性的样品用鸭胚进行病毒分离培养,经普通RT-PCR扩增和基因测序证明均为NDRV.用103.0ELD50剂量的NDRV-SY株人工感染14日龄雏鸭,不同时间采集泄殖腔肛拭子样品,通过荧光定量RT-PCR检测方法进行排毒情况监测,结果显示,雏鸭人工感染NDRV 48 h时可以从泄殖腔检测到病毒排出,持续时间可达20 d,并发现在病毒感染后的第5 d和第10 d出现2次排毒高峰.试验结果表明,建立的NDRV荧光定量RT-PCR检测方法具有良好的特异性和较高的敏感性,可用于NDRV感染的排毒监测以及临床感染的早期诊断和流行病学调查.
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