酿酒酵母表面展示技术表达酸性蛋白酶
Journal of Chinese Institute of Food Science and Technology（2022）
摘要
为解决白葡萄酒蛋白不稳定性问题,实现酸性蛋白酶的利用与酒精发酵的同步进行,本研究以酿酒酵母单倍体菌株BY4741和二倍体菌株82-9-35为宿主菌,通过酵母表面展示系统中的启动子和锚定蛋白的作用在酵母细胞表面表达酸性蛋白酶.将来源于宇佐美曲霉酸性蛋白酶基因(pepA)克隆,构建表达酸性蛋白酶的细胞展示盒,利用同源重组定点整合酸性蛋白酶基因到酿酒酵母的基因位点.经过PCR和测序验证,获得两株可细胞表面展示酸性蛋白酶的单倍体和二倍体的重组菌株,其最高酶活分别是285.71 U/mL和495.24 U/mL.本研究成功构建了利用酿酒酵母细胞壁蛋白SED1作为锚定蛋白的展示系统,为解决葡萄酒中蛋白浑浊的问题提供新思路,为实现pepA酸性蛋白酶全细胞催化剂工业化应用奠定理论基础.
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