脂联素分子受体3下调食管-胃交界腺癌细胞中Twist蛋白水平的分子机制

目的:探讨脂联素分子受体3(PAQR3)下调Twist蛋白水平的分子机制。方法:采用蛋白印迹法(Western blot)、免疫共沉淀(Co-IP)等一系列生化技术检查PAQR3下调Twist蛋白水平的机制。应用SPSS 19.0统计软件分析，组间比较采用单因素方差分析。结果:(1)OE19-PAQR3过表达组(OE19-PAQR3 OV)Twist蛋白水平明显低于对照组(OE19-Vector)，差异有统计学意义(0.426±0.025比1.423±0.088， t＝27.486， P<0.05)；NCI-87-PAQR3过表达组(NCI-87-PAQR3 OV)Twist蛋白水平明显低于对照组(NCI-87-Vector)，差异有统计学意义(0.398±0.022比1.528±0.076， t＝29.337， P<0.05)。(2)过表达PAQR3，再加入MG132抑制剂，发现OE19-PAQR3过表达组(OE19-PAQR3 OV)Twist蛋白水平低于对照组(OE19-Vector)，但差异无统计学意义(1.418±0.075比1.423±0.088， t＝5.173， P>0.05)；NCI-87-PAQR3过表达组(NCI-87-PAQR3 OV)Twist蛋白水平低于对照组(NCI-87-Vector)，但差异无统计学意义(1.512±0.081比1.528±0.076， t＝4.957， P>0.05)；(3)过表达PAQR3慢病毒(PAQR3-OV)感染OE19细胞，采用放线菌酮(CHX)对细胞进行不同时间处理，发现OE19-PAQR3过表达组(OE19-PAQR3 OV)Twist蛋白水平明显低于对照组(OE19-Vector)，差异有统计学意义(0 h：0.426±0.025比1.423±0.088， t＝27.486， P<0.05；2 h：0.306±0.022比1.148±0.073， t＝35.624， P<0.01；4 h：0.228±0.021比0.993±0.085， t＝38.729， P<0.01；6 h：0.135±0.022比0.088±0.066， t＝44.237， P<0.01)。(4)OE19-PAQR3过表达组(OE19-PAQR3 OV)泛素蛋白酶体mRNA水平明显高于对照组(OE19-Vector)，差异有统计学意义(5.285±0.418比2.386±0.141， t＝8.982， P<0.05)；NCI-87-PAQR3过表达组(NCI-87-PAQR3 OV)泛素蛋白酶体mRNA水平明显高于对照组(OE19-Vector)，差异有统计学意义(4.918±0.423比2.336±0.121， t＝9.265， P<0.05)；且泛素单体Ub mRNA的表达是呈时间依赖性的，多聚泛素蛋白水平上调，在8 h达到最大值。OE19-PAQR3过表达组(OE19-PAQR3 OV)多聚泛素蛋白水平明显高于对照组(OE19-Vector)，差异有统计学意义(1.731±0.069比0.438±0.024， t＝26.825， P<0.05)；NCI-87-PAQR3过表达组(NCI-87-PAQR3 OV)多聚泛素蛋白水平水平明显高于对照组(OE19-Vector)，差异有统计学意义(1.912±0.073比0.421±0.232， t＝28.33 5， P<0.05)。(5)OE19-PAQR3过表达组(OE19-PAQR3 OV)20S蛋白酶体活性明显高于对照组(OE19-Vector)，差异有统计学意义(2748.452±24.124比1267.788±21.467， t＝24.235， P<0.05)；NCI-87-PAQR3过表达组(NCI-87-PAQR3 OV)20S蛋白酶体活性水平明显高于对照组(OE19-Vector)，差异有统计学意义(2 968.577±25.346比1 382.526±23.357， t＝25.526， P<0.05)。(6)采用Co-IP和Western blot检测Twist/泛素共聚物的水平同对照组比较有变化，OE19-PAQR3过表达组(OE19-PAQR3 OV)Twist蛋白水平明显低于对照组(OE19-Vector)，差异有统计学意义(0.412±0.022比1.536±0.077， t＝26.833， P<0.05)；NCI-87-PAQR3过表达组(NCI-87-PAQR3 OV)Twist蛋白水平明显低于对照组(NCI-87-Vector)，差异有统计学意义(0.412±0.023比1.566±0.079， t＝28.754， P<0.05)。 结论:Twist介导PAQR3对EMT和转移的调节功能，表明靶向Twist可提高PAQR3控制肿瘤转移。