当归拈痛汤对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞自噬与凋亡的影响

目的:研究当归拈痛汤对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞自噬与凋亡的影响,进一步探讨当归拈痛汤防治RA的相关机制.方法:收集临床RA患者的滑膜组织,分离出成纤维样滑膜细胞(FLS)并进行培养,将RA-FLS细胞分为4组,分别为空白血清组、当归拈痛汤含药血清低、中、高剂量组.通过划痕实验,transwell侵袭实验检测当归拈痛汤对RA-FLS细胞迁移、侵袭能力的影响;Hoechst 33342法检测RA-FLS细胞凋亡水平;单丹磺酰尸胺(MDC)染色检测细胞自噬水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-timePCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),微管相关蛋白1轻链3(LC3),自噬关键分子酵母Atg6同系物l(Beclin1)的mRNA和蛋白表达水平.结果:与正常血清组比较,当归拈痛汤含药血清低、中、高剂量组均能减缓划痕愈合(P＜0.01),并且能显著减少侵袭到下室的RA-FLS细胞的数目(P＜0.01);Hoechst33342结果显示当归拈痛汤含药血清低、中、高可以不同程度促进RA-FLS细胞凋亡(P＜0.01);MDC染色后,低、中、高当归拈痛汤含药血清组中自噬小体明显减少;与空白含药血清组比较,当归拈痛汤含药血清低、中、高剂量干预后,Bcl-2,LC3,Beclin1的mRNA和蛋白的表达水平显著下降(P＜0.01),Bax的mRNA和蛋白的表达水平显著升高(P＜0.01).结论:当归拈痛汤对RA成纤维样滑膜细胞增殖有明显抑制作用,其作用机制可能与抑制自噬、促进凋亡有关.