钩吻配伍玉叶金花对外排转运蛋白BCRP和药物代谢酶CYP3A11的影响

目的:钩吻配伍玉叶金花对外排转运蛋白乳腺癌耐药蛋白(BCRP)和细胞色素P450 3A11(CYP3A11)的影响,探讨其配伍减毒的机制;同时添加核受体激活剂干预探讨核受体是否在该过程中有调节作用.方法:将C57BL/6小鼠分为空白组,钩吻组(GE组,0.25g·kg-1),钩吻配伍玉叶金花组(GE+MP组,0.25g·kg-1+10g·kg-1),钩吻+孕烷X受体(PXR)激活剂(利福平)组(GE+Rif组,0.25g·kg-1+50 mg·kg1),配伍+利福平组(GE+MP+Rif组,0.25g·kg1+10g·kg-1+50 mg·kg-1),钩吻+组成型雄甾烷受体(CAR)激活剂﹛1,4-双[2-(3,5-二氯吡啶氧)]苯,TCPOBOP﹜组(GE+TCP组,0.25g·kg-1+0.5 mg·kg-1),配伍+CAR激活剂组(GE+MP+TCP组,0.25 g·kg-1+10 g·kg-1+0.5 mg·kg-1).连续给药14 d,末次给药l h后脱颈处死小鼠,取肝组织.左肝组织采用苏木素-伊红(HE)染色观察其病理学变化;右肝组织采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)对其进行mRNA及蛋白水平的检测,检测其对BCRP,CYP3A11基因和蛋白的影响.结果:GE+Rif组小鼠存活率25％,存活率最低,GE组存活率40％,GE+MP组存活率为80％,其他组均存活未见死亡.GE组小鼠肝脏细胞出现明显病变,与GE组比较,GE+MP组肝细胞病理状态都有所缓解;GE+Rif组小鼠肝脏细胞病理状态严重,与GE+Rif组比较,GE+MP+Rif组小鼠肝脏细胞肝细胞病变有所缓解;GE+TCP组小鼠肝脏出现轻微病变,GE+MP+TCP组小鼠肝脏细胞病变不明显;与GE+MP组比较,GE+MP+TCP组病变程度有轻微缓解但差异不大.与空白组比较,GE组BCRP蛋白及mRNA表达明显下调(P＜0.05,P＜0.01);GE组CYP3A11蛋白表达显著下调(P＜0.01),mRNA表达有下调趋势但差异无统计学意义.与GE组比较,GE+MP组BCRP蛋白及mRNA表达均明显上调(P＜0.05,P＜0.01);CYP3A11蛋白及mRNA表达有上调趋势,但差异无统计学意义.与GE组比较,GE+Rif组BCRP蛋白表达明显下调(P＜0.05);与GE+MP组比较,GE+MP+Rif组BCRP蛋白及mRNA表达明显下调(P＜0.05,P＜0.01);PXR激活剂利福平在钩吻配伍前后均对BCRP产生调节.与GE组比较,GE+TCP组CYP3A11蛋白和mRNA表达明显上调(P＜0.05,P＜0.01);与GE+MP组比较,GE+MP+TCP组CYP3A11蛋白和mRNA表达明显上调(P＜0.05,P＜0.01);CAR激活剂TCPOBOP在钩吻配伍前后对CYP3A11也存在调节作用.结论:钩吻配伍玉叶金花毒性降低与外排转运蛋白BCRP和药物代谢酶CYP3A11密切相关.