益生菌Nissle 1917鞭毛蛋白高变区随机缺失及鞭毛展呈外源抗原的构建

[目的]探索益生菌Nissle 1917无质粒克隆菌株(EcNc)鞭毛蛋白高变区展呈外源抗原的位点,为EcN靶向投递外源抗原提供操作策略,为优化构建遗传稳定、定植力强的功能性益生菌疫苗打下基础.[方法]以重组质粒pBR322-fliC为模板,构建Ec-Nc fliC高变区随机缺失质粒库、筛选有效的fliC高变区缺失区域、构建EcNc FliC高变区突变株展呈外源抗原、通过透射电镜和运动性观察及IPEC-J2细胞黏附试验对重组菌株鞭毛展呈外源抗原的能力进行检测.[结果]EcNc fliC高变区不同部位出现缺失,获得EcNc fliC高变区随机缺失质粒库;经细菌运动性检测和测序分析,筛选到fliC基因缺失910～927 bp处碱基序列后不影响Ec-Nc鞭毛丝的形成和运动性能;将F18大肠杆菌黏附素FedF亚单位与仔猪小肠上皮细胞相互作用的受体结合域(第6～109位氨基酸残基区段)碱基序列插入该位点.[结论]成功将FedF亚单位受体结合域的50个氨基酸展呈于EcNc表面.