序列变异对miR-378生物发生以及靶标关系的影响

本研究旨在探索序列变异对miR-378的结构、表达水平以及靶标关系的影响.利用PCR测序比对不同猪种miR-378的序列突变,预测突变对miR-378二级结构和自由能的改变;构建miR-378表达载体检测突变对其加工过程中各级产物表达水平的作用;运用TargetScan和TargetRank对突变引起的靶标关系变化进行分析;采用microRNA pull-down技术验证突变对靶标关系的影响.结果发现,在荣昌猪和内江猪群体内pre-miR-378的+49和+68位均发生A>G的序列变异,且改变了pre-miR-378的二级结构和自由能;这两个位点突变后影响了pri-miR-378到pre-miR-378的加工过程,提升了pre-miR-378和成熟体miR-378的表达水平;同时+49/A>G的突变改变了miR-378的功能及其靶标关系,其中GDF6和RAB10分别为突变后获得和缺失的靶基因,而Runx1t1、Galnt3为不受突变影响的靶基因.本研究的结果强调了miRNAs序列变异的重要性及其对miRNAs生物发生和功能的显著影响.