Formación de trampas extracelulares de neutrófilos humanos in vitro: descripción de un método

INTRODUCCION: las trampas extracelulares de neutrofilo (NETs) son estructuras en forma de red compuestas de ADN y proteinas granulares que el neutrofilo libera al espacio extracelular en respuesta a diferentes estimulos. La NETosis es un mecanismo de muerte celular, que ademas cumple una funcion microbicida destruyendo o inhibiendo el crecimiento de microorganismos. OBJETIVO: describir el proceso para inducir, visualizar y cuantificar la formacion de NETs en neutrofilos humanos. METODOS: se aislaron neutrofilos de sangre periferica de individuos sanos y se indujo la produccion de NETs utilizando diferentes concentraciones de PMA a determinados tiempos. La liberacion de ADN se cuantifico por espectrofluorimetria y se evaluo la morfologia de las NETs utilizando microscopia de fluorescencia. Los analisis estadisticos se realizaron con los programas SPSS 17.02 y GraphPad Prism 6. RESULTADOS Y CONCLUSIONES: en el presente trabajo se describe un metodo que sirve para inducir NETs utilizando neutrofilos humanos, el cual es comparable con otros estudios descritos en la literatura. Los resultados y tecnicas descritas aqui se pueden aplicar en ensayos que busquen evaluar el proceso de formacion de NETs in vitro y tiene como intension brindar herramientas metodologicas a los investigadores que deseen estudiar este proceso celular.