管花肉苁蓉多糖水提物的分离及免疫活性研究

目的:分离管花肉苁蓉多糖水提物,考察分离物的体外免疫活性.方法:采用AB-8大孔吸附树脂法对管花肉苁蓉多糖进行脱色,以多糖保留率和多糖脱色率为指标进行综合评分,以吸附速率、脱色时间、上样质量浓度为因素,采用正交实验优化脱色工艺并验证.采用DEAE-650M离子交换柱层析柱对脱色后的管花肉苁蓉多糖水提物进行分离.采用CCK-8法检测不用质量浓度(6.25～100μg/mL)分离前、后各种多糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖率的影响,采用Griess法和酶联免疫吸附测定法检测低、中、高质量浓度(12.5、25、50μg/mL)分离前、后各种多糖对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞一氧化氮(NO)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)释放量的影响.结果:AB-8大孔吸附树脂的最优脱色工艺为吸附流速1.2 BV/h,脱色时间9 h,上样质量浓度25 mg/mL;3次验证实验的综合评分分别为63.43％、63.29％、63.34％,平均值为63.35％(RSD=0.11％,n=3).从管花肉苁蓉多糖水提物中分离出1种中性多糖(CTZ)和5种酸性多糖(CT1、CT2、CT3、CT4、CT5),含量分别为299.2、168.0、123.2、121.6、54.4、11.2 mg/g.与对照组比较,6.25～100μg/mL的CTZ(6.25μg/mL除外)、CT2、CT4、CT5和6.25μg/mL的CTC(即分离前的多糖)均可显著增加RAW264.7细胞的增殖率(P<0.05),6.25～100μg/mL的CT1、CT3和50μg/mL的CTC均可显著降低RAW264.7细胞的增殖率(P<0.05).与LPS组比较,低、中、高质量浓度CTC、CT2、CT3、CT5组和低质量浓度CTZ组细胞的NO释放量均显著降低(P<0.05),高质量浓度CT1、CT4组细胞的NO释放量均显著升高(P<0.05);低、中、高质量浓度各组细胞的IL-6(高质量浓度CT1组和低质量浓度CT5组除外)、TNF-α释放量(中质量浓度CT1组除外)均显著降低(P<0.05).结论:本研究所优化的大孔吸附树脂脱色工艺稳定、可行;管花肉苁蓉多糖水提物中可分离出1种中性多糖、5种酸性多糖,其中酸性多糖CT2的免疫活性较强.