唾液特异性mRNA荧光复合检测体系的构建

目的 基于唾液中特异表达的mRNA标记分子,建立五重荧光复合检测系统,实现对唾液的有效鉴定.方法 采集健康志愿者唾液样本,提取样本总RNA,利用终点逆转录-聚合酶链反应(Endpoint Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,Endpoint RT-PCR)技术扩增3个唾液特异mRNA标记分子MUC7、HTN3、STATH和2个管家基因GAPDH、ACTB,通过毛细管电泳分离检测特异性产物,构建起五重mRNA荧光复合检测体系.同时使用100份样本和6份室温晾干1M、6M的唾液斑样本对体系的特异性、重复性和灵敏度进行验证.结果 在40份唾液样本中均检测到唾液mRNA标记分子MUC7、HTN3、STATH以及管家基因GAPDH、ACTB共5个特异性的峰,而在外周血、月经血、精液和阴道分泌物样本中仅检测到管家基因GAPDH、ACTB,检测灵敏度可达2ng总RNA,且在室温晾干1M、6M的唾液斑样本中仍能检测到唾液特异性标记分子.结论 本研究建立五重mRNA荧光复合扩增检测系统可以有效的将唾液与其他4种法医学常见的体液区分.