新疆地区马呼吸道致病病毒的检测及其遗传进化分析

为了解致汗血马马驹呼吸道疾病的病原,本研究采集新疆乌鲁木齐市南山某汗血马马场82份汗血马的鼻拭子样品(包括4匹患呼吸道疾病的汗血马马驹、6匹健康汗血马马驹和72匹成年健康汗血马),经处理鼻拭子样品、提取病毒RNA、反转录、经PCR扩增及产物纯化后由公司进行高通量测序和宏病毒组学分析.结果显示,与健康马相比,患病马驹鼻拭子样品核酸有1050条reads注释到马疱疹病毒2型(Equid herpesvirus-2,EHV-2)gB基因,且与EHV-2参考株gB基因序列同源性为91.0％～99.3％,初步表明患病马驹鼻拭子样品携带EHV-2.为验证病毒组学结果,参照EHV-2 G9/92(KM924294)gB基因序列,设计引物,经PCR扩增82份汗血马的鼻拭子样品.PCR结果显示患呼吸道疾病马驹鼻拭子样品均扩增出了EHV-2 gB基因片段,EHV-2阳性率为100％(4/4),而健康马驹和成年汗血马鼻拭子样品均呈阴性结果(0/78),表明EHV-2可能与马驹呼吸道疾病有关.同源性分析结果显示,4株EHV-2之间gB基因和氨基酸序列的同源性分别为94.1％～100％和92.0％～100％,与英国、波兰、瑞士、德国和澳大利亚参考株gB基因和氨基酸序列同源性分别为91.0％～99.3％和89.6％～98.2％.gB氨基酸序列遗传进化分析显示,4株EHV-2与波兰、英国参考株处于同一分支,亲缘关系较近.氨基酸位点分析结果显示,4株EHV-2 gB基因编码氨基酸序列均有一些位点发生了突变,主要位于gB蛋白羧基端,表明4株EHV-2 gB基因具有遗传变异多样性.本研究首次在国内马匹中检测到EHV-2,为EHV-2感染致马驹呼吸道疾病的防控及其流行病学研究提供基础数据.