b型流感嗜血杆菌精制多糖分子大小分布及重均分子质量检测方法的改良

目的 改良HPLC(AKTA 层析)系统,采用HPLC-MALLS 系统检测b 型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)精制多糖的分子大小分布及重均分子质量(Mw),并进行方法的验证.方法 采用HPLC(AKTA层析)系统连接示差分析仪检测9批Hib精制多糖供试品的分配系数(KD)及KD值为0.5 的回收率(Rx).采用HPLC 连接18角度静态光散射分析系统MALLS(HPLC-MALLS)检测供试品的Mw、KD及Rx,并对两种系统的测试结果进行相关性分析;验证HPLC-MALLS 方法的重复性、准确性及定量限.结果 9 批供试品经AKTA 层析系统检测,KD为0.29～0.37,Rx 为78％～90％;经 HPLC-MALLS 系统检测,KD为0.31～0.38,Rx为84％～93％,Mw为(1.418～2.281)x 105 g/moL,两种系统检测同批供试品的KD值回归方程为Y = 0.903 X+0.051,r为0.978,表明检测结果具有显著相关性,两种方法等效.9批供试品经HPLC-MALLS/RI系统重复检测6次,Mw、KD及Rx的RSD均小于3.8％,多糖回收率及其RSD分别为80％～87％和0.05％～3.46％;定量限为1 mg/mL.结论 HPLC-MALLS 系统能与HPLC系统基本对接,在准确检测Hib精制多糖Mw 的同时还可检测KD及Rx,且方法的准确性及重复性良好,可作为检测Hib精制多糖分子大小的改良方法.