5型肺炎球菌结合物原液中游离多糖分离方法的建立及验证

目的:建立和验证有效分离5型肺炎球菌结合物原液(结合物原液)中游离多糖的方法，以供测定游离多糖含量。方法:通过游离多糖添加回收率试验以及氯化钠浓度对咔唑-硫酸法吸光度值影响试验，选择结合物原液中游离多糖和多糖-蛋白结合物分离时最佳的氯化钠浓度；通过蛋白回收率试验筛选出该条件下所能沉降蛋白质的浓度范围；比较标准曲线经脱氧胆酸钠(sodium deoxycholate，NaDC)/HCl法处理前后吸光度值的变化，验证NaDC/HCl法对多糖含量检测的影响；对所建立方法的专属性、精密度及准确度进行验证。结果:NaDC/HCl法处理结合物原液时的最佳氯化钠浓度为0.15 mol/L；结合物原液中蛋白浓度在100 μg/ml以内，NaDC/HCl法能实现蛋白质的完全沉淀；NaDC对多糖含量检测无干扰；该方法专一沉淀蛋白质，而对游离多糖无影响；准确度验证试验的回收率在93.17%～102.59%之间；日间以及日内的精密度变异系数均小于10%。结论:NaDC/HCl法能充分分离结合物原液中的多糖-蛋白结合物和游离多糖，具有良好的准确度和重复性，适用于5型肺炎球菌结合物原液中游离多糖含量的测定。